Описание

Реагент для определения гаптоглобина.

Иммунотурбидиметрический метод для определения гаптоглобина. Набор содержит специфичную анти-гаптоглобин поликлональную антисыворотку (2х1 мл), буфер для разведения антисыворотки (1х10 мл), рабочий буферный раствор (2х50 мл) в специальных флаконх для автоматической обработки.

Соотношение: разведенный образец /Реагент А/Раствор ВС 1/18/2. Длина волны 340 нм. Диапазон измерений: 35-700 мг/дл.

РУССКИЙ

 

REF 11050D

 

Гаптоглобин

Количественное определение гаптоглобина иммунотурбидиметрическим методом в сыворотке и плазме

РЕАГЕНТ 1:2 x 50 мл-  РЕАГЕНТ 2: 2x1 мл – РЕАГЕНТ С: 1х10 мл

1.png

СТАНДАРТ/КАЛИБРАТОР: термин относится к стандарту/калибратору

РЕАГЕНТ: термин относится к отдельному реагенту         

КОНТРОЛЬ: термин относится к контролю

 

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ

Помимо возможных рисков, связанных с активными компонентами реактивы могут содержать дополнительные неактивные компоненты, такие как консерванты (например, азид натрия или другие), а также детергенты. Общая концентрация этих компонентов ниже предельно допустимой нормы, предусмотренной директивами 67/548/EEC и 1999/45/EC. Были соблюдены все требования по классификации, маркировке и упаковки реактивов (опасных препаратов). Однако рекомендуется с реактивами работать осторожно, необходимо избегать попадания их в организм, в глаза, на кожу и слизистые оболочки. С реактивами необходимо работать с соблюдением правил надлежащей лабораторной практики.

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Определение гаптоглобина проводится при диагностике  внутрисосудистого и межсосудистого гемолиза,  острого воспалительного процесса и при определении фенотипа при установлении отцовства.

ПРИНЦИП

Определение гаптоглобина основывается на иммунотурбидиметрической специфической реакции при взаимодействии поликлональных антител к гаптоглобину с соответствующим антигеном при оптимальном рН в присутствии полиэтиленгликоля (ПЭГ). Мутность иммунного комплекса прямо пропорциональна концентрации исследуемого вещества в образце.

РЕАГЕНТЫ

Реагенты при хранении в нераспечатанных флаконах при 2-8 °C стабильны до истечения срока годности, указанного на упаковке.

Содержимое набора и начальные концентрации реагентов:

- РЕАГЕНТ А

фосфатный буфер 20 ммоль/л pH 7.5, ПЭГ ≥ 5%, хлорид натрия 150 ммоль/л, азид натрия< 0.1%

- РЕАГЕНТ В

поликлональные антитела к гаптоглобину, азид натрия < 0.1%

- РЕАГЕНТ С

Goods буфер 50 ммоль/л, рН 7.5, хлорид натрия 150 ммоль/л, азид натрия <0.1%

- Запасной флакон

Пустой флакон вместимостью 20 мл, который можно использовать для приготовления Раствора BC, и загрузки в ряд автоматических биохимических анализаторов. Указания по адаптации на наиболее часто встречающихся приборах предоставляются по запросу.

Штрих-код и кодовый номер флакона, указанный на этикетках реагентов, относятся к использованию продукта на анализаторах Hitachi 911/912. Пожалуйста, смотрите протокол по адаптации, вся дополнительная информация предоставляется по запросу.

Подготовка растворов

РЕАГЕНТ A: готов к использованию. Реагенты в нераспечатанных флаконах стабильны до истечения срока действия, указанного на упаковке. После  вскрытия сохраняют стабильность в течение 120 дней при 2-8°C, если избегать контаминации и закрывать флакон сразу после использования.

СТАНДАРТИЗАЦИЯ

CRM 470 (сертифицированный референсный материал) от BCR (Общество по референсным препаратам), соотвтствует RPPHS (эталонный препарат белка в человеческой сыворотке.

ОБРАЗЦЫ

Сыворотка или плазма (гепарин, ЭДТА). Собирают образцы в соответствии с процедурой Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам, указанной в библиографии (1). Стабильность образцов: 2 дня при 2-8°С.

Подготовка образцов/контролей

Перед проведением анализа развести образцы и контроли 1:21 (1 объем + 20 объемов) физиологическим раствором.

Приборы и материалы, необходимые, но не поставляемые

  • Стандартное лабораторное оборудование.
  • Дистиллированная вода.
  • Фотометр со светофильтрами или спектрофотометр.
  • Физиологический раствор (хлорид натрия 9 г/л).

ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА

Длина волны: 340 (334-365) нм

Оптический путь: 1 см

Температура: 37 °C

Образец (см. подготовку)/РЕАГЕНТ 1/РЕАГЕНТ 2: 1/18/2

Измерение: по конечной точке (увеличение)

Перед проведением анализа нагрейте реагенты до рабочей температуры.

Пропорциональное изменение объемов реакционной смеси, указанных в аналитической процедуре не влияет на результат.

Внести в кювету:

 

Реагентный бланк

Калибратор

Образец /

Контроль

Физиологический раствор 

50 мкл

-

-

Рабочий калибратор (1, 2, 3, 4, 5)

-

50 мкл

-

Разведенный образец/Разведенный контроль

(см. приготовление)

-

-

50 мкл

РЕАГЕНТ A

900 мкл

900 мкл

900 мкл

Раствор BC 

100 мкл

100 мкл

100 мкл

Осторожно перемешать и инкубировать 10 минут при рабочей температуре. Определить абсорбцию относительно реагентного бланка для каждого рабочего калибратора, образцов и контролей.

ВЫЧИСЛЕНИЕ

  1. Постройте на миллиметровой бумаге калибровочную кривую, отмечая на оси Y значения оптической плотности соответствующего разведения, а по оси Х значения концентрация для каждого калибратора.
  2.  Обозначьте значение оптической плотности образцов и контролей на калибровочной кривой.
  3. Определите значение концентрации аналита в образцах и контролях по калибровочной кривой.

Коэффициент перевода:

гаптоглобин: [мг/дл] x 0.01 = гаптоглобин [г/л]

РЕФЕРЕНТНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ: 30 - 200 мг/дл

Рекомендуется, чтобы в каждой лаборатории были установлены свои собственные референтные значения. В диагностических целях полученные результаты должны оцениваться с учетом истории болезни пациента и других клинических данных.

Нижний предел обнаружения: 10 мг/дл. Нижний предел обнаружения представляет собой самую низкую измеряемую концентрацию исследуемого вещества, которую можно отличить от нулевого стандарта.

Раствор BC: развести 1 объем Реактива B в 3 объемах Реактива C, осторожно перемешать, избегая образования пены. Стабильность: 60 дней при 2-8°C после приготовления, если не допускать контаминации и закрывать флакон немедленно после использования.

КАЛИБРОВКА

Для калибровки рекомендуется использовать следующие материалы:

Калибратор белки плазмы    REF     11200D          3x1 мл

Жидкая калибровочная сыворотка. Использовать калибратор для построения калибровочной кривой как указано в таблице.

Калибратор белки плазмы    REF     11206D          4x1 мл

Жидкая концентрированная калибровочная сыворотка. Использовать калибратор для работы на анализаторах без процедуры разведения.

Для построения калибровочной кривой использовать калибратор REF11200D в соответствии с приведенной ниже таблицей. Калибратор, в отличие от образцов и контролей предварительно разводить 1:21 не нужно.

ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОЙ КРИВОЙ

Рабочие калибраторы

1

2

3

4

5

Калибратор белки плазмы – REF11200D

200 мкл

-

-

-

-

Физиологический раствор

800 мкл

300 мкл

300 мкл

300 мкл

300 мкл

Рабочий калибратор 1

-

300 мкл

-

-

-

Рабочий калибратор 2

-

-

300 мкл

-

-

Рабочий калибратор 3

-

-

-

300 мкл

-

Рабочий калибратор 4

-

-

-

-

300 мкл

Соотношение при разведении

1:5

1:10

1:20

1:40

1:80

[аналит] мг/дл соответствует разведению образца 1:21

4,2 х [C]

2,1 х [C]

1,05 х [C]

0,525 х [C]

0,2625 х [C]

[C] = концентрация определяемого вещества в мг/дл, указанная в инструкции к набору калибратор белков плазмы REF11200D.

Определяемое вещество = гаптоглобин


КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Рекомендуется использовать следующие контрольные материалы разных уровней для подтверждения точности анализа:

Иммуноконтроль 1           REF     11210       1x5 мл

Иммуноконтроль 2           REF     11212       1x5 мл

Жидкая контрольная сыворотка. Для использования следуйте инструкции в наборе.

Иммуноконтроль (2 уровня)          REF     11211A    2x(2x1) мл

Жидкая контрольная сыворотка, два уровня. Для использования следуйте инструкции в наборе.

Эффект прозоны: эффект прозоны не наблюдается вплоть до концентрации 3500 мг/дл.

Следующие результаты оценки воспроизводимость внутри серии и между сериями анализов, а также точности получены с использованием автоматического анализатора, при случайной выборке и автоматическом разведении образцов. Эти данные могут меняться в зависимости от характеристик прибора.

ТОЧНОСТЬ

Воспроизводимость внутри серии анализов: определялась в 20 повторностях каждого контроля (2 уровня - L1/L2). Результаты:

 

Внутрианалитическая (мг/дл)

 

L1

L2

Среднее

75.95

240.85

SD

1.54 

8.65

CV%

2.03 

3.59

Воспроизводимость между сериями анализов: определялась в течение 10 дней в 2 повторностях для каждого контроля (2 уровня - L1/L2). Результаты:

 

Среднее

Внутри серии

Между сериями

Всего

мг/дл

SD

CV%

SD

CV%

SD

CV%

L1

77.75 

1.07

1.38 

2.81 

3.61 

3.01 

3.87

L2

240.60

1.61

0.67

15.52

6.45

15.61

6.49

Точность: тест (у) сравнили с коммерчески доступным иммунотурбидиметрическим методом (x). Результаты:

N = 60, r = 0.9938, y = 1.0049 x  -  2.101.

Диапазон измерений: 10 - 700 мг/дл. Если концентрация образца превышает диапазон измерений, разведите его физиологическим раствором и результаты умножьте на коэффициент разведения.

Интерференция: на результат теста не влияет присутствие билирубина до 30 мг/дл, гемоглобина до 0.5 г/дл, липемии (триглицериды до 1000 мг/дл) и ревматоидного фактора до 100 МЕ/мл.

УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ

Реагенты утилизируются в соответствии с местными нормативными актами.

 

БИБЛИОГРАФИЯ

1) NCCLS. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture; Approved Standard - Fifth Edition (H3-A5). Wayne, PA: The National Committee for Clinical Laboratory Standards, 2003.

2) Kaplan, L.A., Pesce, A.J.: “Clinical Chemistry”, Mosby Ed. (1996).

3) EU-Dir 1999/11 Commission Directive of 8 March 1999 adapting to technical progress the principles of Good Laboratory  Practice as specified in Council Directive 87/18/EEC.

4) Tietz Textbook of Clinical Chemistry (Edited by Burtis CA and Ashwood ER Eds): Third Edition WB Saunders Company (1999).

Заявка на покупку

Хотите получить больше информации?Обращайтесь к нам:+7 (495) 933-21-46