Описание

Реагент для определения альфа 2-макроглобулина необходим для иммунотурбидиметрии, которая является одним из самых современных и эффективных методов диагностики белков сыворотки крови. Иммунотурбидиметрический метод дает возможность точно определить концентрацию белка по изменению мутности раствора в результате реакции антиген-антитело и применяется при невозможности определения содержания белка по его ферментативной активности.

Данный набор содержит специфичную антиальфа 2-макроглобулин поликлональную антисыворотку, (2х1 мл), буфер для разведения антисыворотки (1х10 мл), рабочий буферный раствор (2х50 мл) в специальных флаконах для автоматической обработки. Соотношение: разведенный образец /Реагент А/Раствор ВС 1/9/1. Длина волны 340 нм. Диапазон измерений: 70-1500 мг/дл.

Меры предосторожности

Помимо возможных рисков, связанных с активными компонентами, реактивы могут содержать дополнительные неактивные компоненты, такие как консерванты (например, азид натрия или другие), а также детергенты. Общая концентрация этих компонентов ниже предельно допустимой нормы, предусмотренной директивами 67/548/EEC и 1999/45/EC. Были соблюдены все требования по классификации, маркировке и упаковки реактивов (опасных препаратов). Однако рекомендуется с реактивами работать осторожно, необходимо избегать попадания их в организм, в глаза, на кожу и слизистые оболочки. С реактивами необходимо работать с соблюдением правил надлежащей лабораторной практики.

Клиническое значение

Альфа 2-макроглобулин является гликопротеином, который используется в качестве маркера мембранной проницаемости и является ингибитором протеиназы плазмы. Возрастание уровня альфа 2-макроглобулина может отмечаться при различных патологических состояниях, таких, как нефротический синдром, нарушение гормональной функции, или нарушения развития в детском возрасте. Сниженные уровни альфа 2-макроглобулина в сыворотке крови может отмечаться при воспалительных процессах, панкреатите и при карциноме простаты.

Принцип определения альфа 2-макроглобулина 

Количественное определение альфа-2 макроглобулина иммунотурбидиметрическим методом в сыворотке и плазме: РЕАГЕНТ 1: 2 x 50 мл, РЕАГЕНТ 2: 2 x 1 мл, Реагент С: 1х10 мл. REF 11018D.

Определение альфа 2-макроглобулина основывается на иммунотурбидиметрической специфической реакции при взаимодействии поликлональных антител к альфа 2-макроглобулина с соответствующим антигеном при оптимальном рН в присутствии полиэтиленгликоля (ПЭГ). Мутность иммунного комплекса прямо пропорциональна концентрации исследуемого вещества в образце. 

Реагенты: содержимое набора и начальные концентрации

Реагенты при хранении в нераспечатанных флаконах при 2-8 °C стабильны до истечения срока годности, указанного на упаковке.

  • Реагент 1: фосфатный буфер 20 ммоль/л pH 7.5, ПЭГ ≥ 5%, хлорид натрия 150 ммоль/л, азид натрия< 0.1%.
  • Реагент 2: поликлональные антитела к альфа 2-макроглобулину, азид натрия < 0.1%.
  • Реагент 3: Goods буфер 50 ммоль/л pH 7.5, хлорид натрия 150 ммоль/л, азид натрия < 0.1%.
  • Запасной флакон: пустой флакон вместимостью 20 мл, который можно использовать для приготовления Раствора BC, и загрузки в ряд автоматических биохимических анализаторов. Указания по адаптации на наиболее часто встречающихся приборах предоставляются по запросу.
  • Жидкая контрольная сыворотка, два уровня. Для использования следуйте инструкции в наборе.

Штрих-код и кодовый номер флакона, указанный на этикетках реагентов, относятся к использованию продукта на анализаторах Hitachi 911/912. Пожалуйста, смотрите протокол по адаптации, вся дополнительная информация предоставляется по запросу.

Стандартизация

CRM 470 (сертифицированный референтный материал) из Бюро Сообщества по референтным материалам (BCR), соответствует RPPHS (референтный препарат по белкам сыворотки крови человека).

Образцы

Сыворотка или плазма (гепарин, ЭДТА). Собирают образцы в соответствии с процедурой Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам, указанной в библиографии (1). Стабильность образцов: 5 дней при 2-8°С.

Подготовка образцов/контролей

Перед проведением анализа следует развести образцы и контроли 1:21 (1 объем + 20 объемов) физиологическим раствором.

Вам также понадобятся (не входят в набор):

  • Стандартное лабораторное оборудование.
  • Дистиллированная вода.
  • Фотометр со светофильтрами или спектрофотометр.
  • Физиологический раствор (хлорид натрия 9 г/л).

Процедура анализа

Длина волны - 340 (334-365) нм. Оптический путь - 1 см. Температура - 37 °C. Разбавленный образец/РЕАКТИВ A/Раствор BC: 1/9/1. Реакция - конечная точка (увеличение). Перед проведением анализа нагрейте реагенты до рабочей температуры. Пропорциональное изменение объемов реакционной смеси, указанных в аналитической процедуре не влияет на результат.

 

 Внести в кювету 

 Реагентный  бланк 

 Калибратор 

 Образец/  Контроль 

 Физиологический  раствор 

100 мкл

-

-

 Рабочий калибратор (1,2,3,4,5;) 

-

100 мкл

-

 Разведенный образец/ Разведенный контроль (см. процедуру приготовления) 

-

-

100 мкл

 Реагент А 

900 мкл

900 мкл

900 мкл

 Раствор ВС 

100 мкл

100 мкл

100 мкл

Аккуратно перемешать и инкубировать в течение 10 минут при рабочей температуре. Считать абсорбцию против реагентного бланка для каждого рабочего калибратора, образца и контроля.

 

Вычисление

  • Постройте на миллиметровой бумаге калибровочную кривую, отмечая на оси Y значения оптической плотности соответствующего разведения, а по оси Х значения концентрация для каждого калибратора.
  • Обозначьте значение оптической плотности образцов и контролей на калибровочной кривой.
  • Определите значение концентрации аналита в образцах и контролях по калибровочной кривой.

Коэффициент перевода

Альфа-2-макроглобулин:

[мг/дл] x 0.01 = Альфа-2-макроглобулин [г/л].

Референтные значения:

Мужчины: 150 - 350 мг/дл, женщины: 175 – 420 мг/дл.

Рекомендуется, чтобы в каждой лаборатории были установлены свои собственные референтные значения. В диагностических целях полученные результаты должны оцениваться с учетом истории болезни пациента и других клинических данных.

Подготовка реагентов

Реагент A: готов к применению. Реагент в невскрытых флаконах стабилен до окончания срока годности, указанного на упаковке.

Стабильность: 120 дней при 2-8 °C после вскрытия, если не допускать контаминации и закрывать флаконы немедленно после использования.

Реагент BC: развести 1 объем Реагента B в 3 объемах Реагента C, осторожно перемешать, избегая образования пены. Стабильность: 60 дней при 2-8°C после приготовления, если не допускать контаминации и закрывать флаконы немедленно после использования.

Калибровка

Для калибровки рекомендуется использовать следующие материалы:

  • Калибратор белки плазмы. REF 11200D 3x1 мл.
  • Жидкая калибровочная сыворотка.

Использовать калибратор для построения калибровочной кривой как указано в таблице. Калибратор, в отличие от образцов и контролей, предварительно разбавлять 1:21 не нужно.

Построение калибровочной кривой

Рабочие калибраторы

1

2

3

4

5

Калибратор белки плазмы

200 мкл

-

-

-

-

Физиологический раствор

800 мкл

300 мкл

300 мкл

300 мкл

300 мкл

Рабочий калибратор 1

-

300 мкл

-

-

-

Рабочий калибратор 2

-

-

300 мкл

-

-

Рабочий калибратор 3

-

-

-

300 мкл

-

Рабочий калибратор 4

-

-

-

-

300 мкл

Пропорции разведения

1:5

1:10

1:20

1:40

1:80

[аналит] мг/дцл в соответствии с пропорцией разведения образца 1:21

4.2х[C]

2.1x[C]

1.05x[C]

0.525x[C]

0.2625[C]

[C] = концентрация аналита в мг/дл, указанная во вкладыше к набору калибраторов плазмы крови REF 11200D

Аналит = альфа 2 макроглобулин


Контроль качества

Рекомендуется использовать следующие контрольные материалы разных уровней для подтверждения точности анализа:

Иммуноконтроль 1           REF     11210       1x5 мл

Иммуноконтроль 2           REF     11212       1x5 мл

Жидкая контрольная сыворотка. Для использования следуйте инструкции в наборе.

Иммуноконтроль (2 уровня)          REF     11211A    2x(2x1) 

Характеристики

Интерференция: на результат теста не влияет присутствие билирубина до 30 мг/дл, гемоглобина до 0.5 г/дл, липемии (триглицериды до 1000 мг/дл) и ревматоидного фактора до 70 МЕ/мл.

Диапазон измерений: 70 - 1500 мг/дл. Если концентрация образца превышает диапазон измерений, разведите его физиологическим раствором и результаты умножьте на коэффициент разведения.

Нижний предел обнаружения: 10 мг/дл. Нижний предел обнаружения представляет собой самую низкую измеряемую концентрацию исследуемого вещества, которую можно отличить от нулевого стандарта.

Эффект прозоны: эффект прозоны не наблюдается вплоть до концентрации 13200 мг/дл.

Следующие результаты оценки воспроизводимость внутри серии и между сериями анализов, а также точности получены с использованием автоматического анализатора, при случайной выборке и автоматическом разведении образцов. Эти данные могут меняться в зависимости от характеристик прибора.

Воспроизводимость внутри серии анализов определялась в 20 повторностях каждого контроля (2 уровня - L1/L2).

Результаты:

L1: среднее значение 98.70 мг/дл, SD 2.03, CV% 2.06

L2: среднее значение 295.45 мг/дл, SD 5.47, CV% 1.85.

Воспроизводимость между сериями анализов определялась в течение 10 дней в 2 повторностях для каждого контроля (2 уровня - L1/L2).

Результаты:

 

 Среднее 

 Внутри серии 

 Между сериями 

Всего

мг/дл

SD

CV%

SD

CV%

SD

CV%

L1

99.60

2.17

2.18

2.10

2.11

3.02

3.03

L2

294.85

3.37

1.14

4.97

1.69

6.01

2.04

 

Точность: тест (у) сравнили с коммерчески доступным иммунотурбидиметрическим методом (x). Результаты: N = 60, r = 0.99675, y = 1.0171 x  -  2.8505.

Утилизация отходов

Реагенты утилизируются в соответствии с местными нормативными актами.

Библиография

  • NCCLS. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture; Approved Standard - Fifth Edition (H3-A5). Wayne, PA: The National Committee for Clinical Laboratory Standards, 2003.
  • Kaplan, L.A., Pesce, A.J.: “Clinical Chemistry”, Mosby Ed. (1996).
  • EU-Dir 1999/11 Commission Directive of 8 March 1999 adapting to technical progress the principles of Good Laboratory  Practice as specified in Council Directive 87/18/EEC.
  • Tietz Textbook of Clinical Chemistry (Edited by Burtis CA and Ashwood ER Eds): Third Edition WB Saunders Company (1999).

Заявка на покупку

Хотите получить больше информации?Обращайтесь к нам:+7 (495) 933-21-46
11050D Гаптоглобин 2x50; 2x4
Цена: 80.00 Евро
В наличии
S/11012N Альфа 1 анти-трипсин 2х50+2х4 мл
Цена: 80.00 Евро
В наличии