REF 17642Н

Колориметрическое определение общего билирубина в сыворотке или плазме крови по модифицированному методу Jendrassik - Grof.

реагент 1a: 7 х 45 мл – реагент 1b: 1 х 20 мл.

БИЛИРУБИН ОБЩИЙ

ЖИДКИЙ

 Реагент 1а содержит хлористоводородную кислоту.

R 36 /37/38:          раздражает глаза, дыхательные пути и кожу.

S 26:                      в случае контакта с глазами немедленно промыть большим количеством воды и обратиться к врачу.

Меры безопасности при применении:

Помимо возможных рисков в отношении химически активных компонентов реактива, продукт может содержать такие неактивные компоненты, как консерванты (например, азид натрия или другие) и детергенты. Общая концентрация этих компонентов ниже пределов, указанных в ранее изданных Директивах 67/548/ЕЕС и 1999/45/ЕС и дополнениях и изменениях в отношении классификации, маркировки и упаковки опасных химических соединений (реагентов). Однако, рекомендуется осторожное обращение с продуктом, необходимо также избегать контактов с глазами, кожей и слизистой оболочкой, приема внутрь, и применять лабораторные реагенты в соответствии с правилами добросовестной лабораторной практики.

Резюме:

Измерение уровня общего и прямого билирубина используется при диагностике и контроле таких заболеваний печени, как гепатит и цирроз, гемолитических болезнях и заболеваниях желчных путей. В частности, высокие уровни общего билирубина могут быть индикаторами избыточного гемолиза или печеночных нарушений катаболизма гемоглобина.

Принцип тестирования:

Общий билирубин  в кислом растворе, содержащем кофеин, реагирует с диазотированной сульфаниловой кислотой, образуя окрашиваемый комплекс азосоединения (азобилирубин). Интенсивность окрашивания комплекса пропорциональна концентрации общего билирубина, присутствующего в анализируемом образце.

Реагенты:

Реагенты, при их хранении при температуре 2-8 ⁰С в закрытых флаконах, стабильны в течение срока годности, указанного на упаковке.

Компоненты набора и начальная концентрация химически активных компонентов:

 Реагент 1а:

сульфаниловая кислота 10 ммоль / л, хлористоводородная кислота 0.8 моль / л, кофеин ≤ 0.6 моль / л.

Реагент 1b:  натрия нитрит ≤ 50 ммоль / л.

Приготовление растворов реагентов:

Реагент 1а и Реагент 1b: используются для приготовления Раствора R1.

Раствор  R1: добавить 1 флакон Реагента 1а к 2.5 мл Реагента 1b. Перемешивать несколько минут.

Реагент 1а содержит в качестве добавки мочевину. При проведении серийного анализа образцов  не проводите анализ на мочевину сразу же после проведения определения общего билирубина на автоматических анализаторах, работающих по принципу генератора случайных чисел.

Стабильность

В аппарате: 30 дней, если избегать контаминации.

Калибровка: 14 дней. Повторить калибровку при изменении в партии реактива.

 Калибровка: для калибровки использовать только следующие материалы:

Clin Chem Cal    REF 16550           4 x 3 (мл).

Мультипараметрическая лиофилизованная сыворотка для калибровки. Для применения следовать инструкциям к тест-набору.

Контроль качества:

Для подтверждения точности теста использовать следующие контрольные материалы для различных концентраций аналита:

Clin Chem Control 1                         REF 16150           6 x 5 (мл).

Мультипараметрическая лиофилизованная контрольная сыворотка. Для применения следовать инструкциям к тест-набору.

Clin Chem Control 2                         REF 16250           6 x 5 (мл).

Мультипараметрическая лиофилизованная контрольная сыворотка. Для применения следовать инструкциям к тест-набору.

Стандартизация

Jendrassik – Grof.

Анализируемый образец:

Сыворотка или плазма (гепарин). Не использовать гемолизированные образцы.

Забор образцов вести в соответствии с процедурой NCCLS, указанной в библиографии (1).  Стабильность образца

7 дней при температуре 2-8Сº или 6 месяцев  при температуре -20Сº Рекомендуется хранить в защищенном от света месте.

Требуемые оборудование и материалы, не входящие в комплект поставки:

- обычное лабораторное оборудование.

Аналитическая процедура:

Длина волны: 570 нм (основная)

700 нм (референтная)

Длина ячейки: 1 см.

Температура: 37 ⁰С.

Разведение образца / Раствора R1: 1 / 15

Реакция: конечная точка (увеличение).

Перед процедурой дать реагентам достичь рабочей температуры. Пропорциональное изменение объемов реагентов, указанных для аналитической процедуры, не влияет на результат.

ПРИМЕР АНАЛИТИЧЕСКОЙ ПРОЦЕДУРЫ НА АВТОМАТИЗИРОВАННОМ АППАРАТЕ

Время 0

Калибратор/контрольные образцы/образец = 17 мкл

Раствор R1 = 250 мкл

Через 600 сек

Считывание

ВЫЧИСЛЕНИЕ

1. Постройте калибровочную кривую, откладывая на миллиметровой бумаге значение абсорбции (ось у) против их концентрации в мг/дл (ось х) для каждого калибратора.

2. Отметьте на калибровочной кривой значение абсорбции образцов и контрольных образцов.

3. Экстраполировать значение в мг/дл образцов и контрольных образцов из калибровочной кривой.

Коэффициент пересчета:

Общий билирубин: (мг/дл) х 17.1 = общий билирубин (мкмоль/л).

Референтные величины:

Для взрослых: 0.3 – 1.2 мг/дл

Новорожденные (0-1 дней): 1.4 - 8.7 мг/дл

Новорожденные (1-2 дней): 3.4 - 11.5 мг/дл

новорожденные (3-5 дней): 1.5 - 12.0 мг/дл

Рекомендуется, чтобы каждая лаборатория устанавливала свои собственные ожидаемые пределы. Для диагностических целей, результаты всегда должны оцениваться с учетом истории болезни пациента и всех других клинических проявлений.

Процедура анализа:

Чувствительность: 0.05 мг/дл. Чувствительность рассчитывалась в 20 х3 повторностях х  серию изотонического раствора и фиксировалась как «среднее нулевое значение + 3 стандартных отклонений»

Внутрианалитическая точность: определялась  в 20 повторностях на двух  контрольных образцах (2 уровня L1/L2) и сыворотке человека (L3) Результаты следующие:

Межаналитическая точность: определялась из 5х2х4 (день х серия х повтор) в каждом контрольном образце (3 уровня L1/L2/L3). Результаты следующие:

Точность: этот тест (у) сопоставляется с коммерческим тестом (х). Получены следующие результаты:

N = 60; r = 0.96; y = 1.01 x +0,05.

Интерференция: на результат теста не влияет присутствие аскорбиновой кислоты до 100 мг/дл, гемоглобина до 50 мг/дл и липидов до 1000 мг/дл.

В гемолизованных образцах, на результат теста влияет присутствие гемоглобина, вызывая ошибочное занижение результатов. Использовать  гемолизованные образцы не рекомендуется.

Измеряемый диапазон:  0.05 – 20 мг/дл. Образцы с концентрацией общего билирубина выше 20 мг/дл необходимо разбавить в пропорции 1 : 10 физиологическим раствором и полученный результат умножить на 10.

Утилизация отходов:

Утилизацию реагентов производят в соответствии с требованиями местных законодательных норм.

Библиография:

1) NCCLS Procedures for the Collection of Diagnostic

Blood Specimens by Venipuncture; Approved Standard -

Fifth Edition (H3-A5). Wayne, PA: The National

Committee for Clinical Laboratory Standards, 2003.

2) Pesce, A.J., Kaplan, L.A.: “Methods in Clinical

Chemistry”, Mosby Ed. (1987).

3) Burtis C.A., Ashwood E.R.: “Tietz Textbook of Clinical

Chemistry”, W.B. Saunders Company Ed. (3rd edition,

1999).

4) Guder W.G.: “The Quality of Diagnostic Sample”.

Recommendations of the Working Group on

Preanalytical Quality of the German Society for Clinical

Chemistry and the German Society for Laboratory

Medicine. (1st Edition - 2001).

5) Jakobs, D.S., Kasten, Jr., B.L., DeMott, W.R., Wolfson,

W.L.: “Laboratory Test Handbook”, Lexi-Comp and

Williams & Wilkins Ed. (2nd Edition - 1990).