МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ

Помимо возможных рисков, связанных с активными компонентами реактивы могут содержать дополнительные неактивные компоненты, такие как консерванты (например, азид натрия или другие), а также детергенты. Общая концентрация этих компонентов ниже предельно допустимой нормы, предусмотренной директивами 67/548/EEC и 1999/45/EC. Были соблюдены все требования по классификации, маркировке и упаковки реактивов (опасных препаратов). Однако рекомендуется с реактивами работать осторожно, необходимо избегать попадания их в организм, в глаза, на кожу и слизистые оболочки. С реактивами необходимо работать с соблюдением правил надлежащей лабораторной практики.

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Аланинаминотрансфераза (АЛТ) и аспартатаминотрансферазf (АСТ) являются наиболее важными представителями группы ферментов, катализирующих преобразование альфа-кетокислот в аминокислоты путем переноса аминогрупп.

АЛТ является специфическим печеночным ферментом и его активность является маркером заболеваний печени и желчных путей. AСТ является цитоплазматическим митохондриальным ферментом, поэтому повышение активности фермента может отмечаться при инфаркте миокарда, мышечной дистрофии или поражении органов.

ПРИНЦИП

Аланинаминотрансфераза (АЛТ) катализирует реакцию трансаминирования между альфа-кетоглутаровой кислотой и L-аланина с образованием L-глутаминовой кислоты и пировиноградной кислоты. Образуемая пировиноградная кислота в присутствии лактатдегидрогеназы (ЛДГ), реагирует с бета-NADH2 с образованием молочной кислоты и бета-NAD в том же количестве. Путем измерения изменения величины оптической плотности бета-NAD за фиксированное время можно рассчитать активность фермента в анализируемом образце.

РЕАГЕНТЫ

Реагенты при хранении в нераспечатанных флаконах при 2-8 °C стабильны до истечения срока годности, указанного на упаковке.

Содержимое набора и начальные концентрации реагентов:

- РЕАГЕНТ 1: Трис буфер 0.12 моль/л, рН = 7.5; ЭДТА 6.0 ммоль/л; L-аланин 0.50 моль/л, лактатдегидрогеназа ≥ 3 кЕд/л, азид натрия < 0.1 %.

- РЕАГЕНТ 2: карбонатный буфер 0.05 моль/л, рН = 9.7; альфа-кетоглутарат 0.12 ммоль/л, бета-NADH2 2.5 ммоль/л, азид натрия < 0.1 %.

Подготовка реагентов

РЕАГЕНТ 1 и РЕАГЕНТ 2: готовы к применению.

СТАБИЛЬНОСТЬ

На борту анализатора: 30 дней, избегать контаминации реагента.

Калибровка: 14 дней. Перекалибровать при смене лота реагента.

КАЛИБРОВКА

ВЫЧИСЛЕНИЕ

1. Постройте на миллиметровой бумаге калибровочную кривую, отмечая на оси Y значения оптической плотности соответствующего разведения, а по оси Х значения активности (Ед/л) для каждого калибратора.

2. Обозначьте значение оптической плотности образцов и контролей на калибровочной кривой.

3. Определите значение концентрации аналита (Ед/л) в образцах и контролях по калибровочной кривой.

Коэффициент перевода:

АСТ: [Ед/л] x 0.01667 = АСТ [μkat/l]

РЕФЕРЕНТНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ:

Мужчины: ≤ 35 Ед/л

Женщины: ≤ 31 Ед/л

Рекомендуется, чтобы в каждой лаборатории были установлены свои собственные референтные значения. В диагностических целях полученные результаты должны оцениваться с учетом истории болезни пациента и других клинических данных.

ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА НА АВТОМАТИЧЕСКОМ АНАЛИЗАТОРЕ HITACHI

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ:

2 Ед/л. Чувствительность вычислялась в 20 повторностях и зарегистрирована как "среднее нулевое значение + 3 SD".

ТОЧНОСТЬ ВНУТРИ СЕРИИ АНАЛИЗОВ:

Определялась в 20 повторностях каждого контроля (L1/L2) и образцах пулированной сыворотки человека (L3). Результаты приведены ниже:

ТОЧНОСТЬ МЕЖДУ СЕРИЯМИ АНАЛИЗОВ:

определялась при проведении 5x2x4 тестов (сутки x серии x повторы) каждого контроля (L1/L2 – 2 уровня) и образцов пулированной сыворотки человека (L3).. Результаты приведены ниже:

Для калибровки рекомендуется использовать следующие материалы:

Калибратор для клинической химии  REF 16550 4x3 мл

Многопараметровая лиофилизированная калибровочная сыворотка. При использовании руководствуйтесь инструкцией, вложенной в набор.

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Для проверки точности теста рекомендуется использовать следующие контрольные материалы при различных уровнях определяемого компонента:

Контроль для клинической химии 1  REF 16150 6 x 5 мл

Многопараметровая лиофилизированная контрольная сыворотка. При использовании руководствуйтесь инструкцией, вложенной в набор.

Контроль для клинической химии 2  REF 16250 6 x 5 мл

Многопараметровая лиофилизированная контрольная сыворотка. При использовании руководствуйтесь инструкцией, вложенной в набор.

СТАНДАРТИЗАЦИЯ

В соответствии с рекомендациями IFCC (Международная Федерация по Клинической химии и лабораторной медицине).

ОБРАЗЦЫ

Сыворотка или плазма (ЭДТА и гепарин). НЕ использовать гемолизированные образцы. Собирайте образцы в соответствии с процедурой Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам, указанной в библиографии (1).

СТАБИЛЬНОСТЬ ОБРАЗЦА

7 дней при 2-8°C или 12 недель при -20°C.

ПРИБОРЫ И МАТЕРИАЛЫ НЕОБХОДИМЫЕ, НО НЕ ПОСТАВЛЯЕМЫЕ

•           Стандартное лабораторное оборудование.

ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА

Длина волны:                  340 нм (основная)

                                            450 нм (референсная)

Оптический путь:            1 см

Температура:                  37 °C

Образец/РЕАГЕНТ 1/РЕАГЕНТ 2: 1/11/1.5

Реакция:            кинетика (уменьшение)

Перед проведением анализа нагрейте реагенты до рабочей температуры.

Пропорциональное изменение объемов реакционной смеси, указанных в аналитической процедуре не влияет на результат.

ПРИМЕР ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИТИЧЕСКОЙ ПРОЦЕДУРЫ НА АВТОМАТИЧЕСКОМ АНАЛИЗАТОРЕ

Время 0

Калибратор/Контроль/Образец = 20 мкл

РЕАГЕНТ 1 = 220 мкл

Через 300 сек

Внесение РЕАГЕНТА 2 = 30 мкл

Через 120 сек

Считывание 1

Через 180 сек

Считывание 2

ТОЧНОСТЬ:

Тест на АСТ (y) сравнили с коммерчески доступным методом (x). Результаты указаны ниже:

N = 60,  r = 0.987,  y = 0.90x + 4.97

ИНТЕРФЕРЕНЦИЯ:

На результат теста не влияет присутствие гемоглобина до 300 мг/дл, билирубина до 30 мг/дл и липидов до 1500 мг/дл.

АНАЛИТИЧЕСКИЙ ДИАПАЗОН

2.0 - 300 Ед/л

Образцы, в которых концентрация аналита выше 300 Ед/л должны быть разведены 1:10 физиологическим раствором, полученный результат умножьте на 10.

УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ

Реагенты утилизируются в соответствии с местными нормативными актами.

БИБЛИОГРАФИЯ

1) NCCLS Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture; Approved Standard - Fifth Edition (H3-A5). Wayne, PA: The National Committee for Clinical Laboratory Standards, 2003.

2) Pesce, A.J., Kaplan, L.A.: “Methods in Clinical Chemistry”, Mosby Ed. (1987).

3) Burtis C.A., Ashwood E.R.: “Tietz Textbook of Clinical Chemistry”, W.B. Saunders Company Ed. (3rd edition, 1999).

4) Guder W.G.: “The Quality of Diagnostic Sample”. Recommendations of the Working Group on Preanalytical Quality of the German Society for Clinical Chemistry and the German Society for Laboratory Medicine. (1st Edition - 2001).

5) Jakobs, D.S., Kasten, Jr., B.L., DeMott, W.R., Wolfson, W.L.: “Laboratory Test Handbook”, Lexi-Comp and Williams & Wilkins Ed. (2nd Edition - 1990).

6) Schumann et al - IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37°C Part 5. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Concentration of Aspartate Aminotransferase - Clin Chem Lab Med 2002; 40 (7): 725-733.