Описание

Реагент для определения холинэстеразы (жидкая).

Кинетический колориметрический оптимизированный метод в соответствии с рекомендациями Немецкого общества клинической химии. Субстрат бутирилтиохолина. ДВА ЖИДКИХ РЕАГЕНТА. Длина влны 415 нм.

Соотношение: Образец/Реагент 1/Реагент 2: 1/50/10. Кинетическое считывание. Лаг-фаза 90 сек. Время считывания 90 сек. Линейность 25.000 Ед/л. FDA 510 (К) №: К981800.

Холинэстераза жидкая  2.png

 

Кинетическое колометрическое определение холинэстеразы в сыворотке и плазме в соответствии с рекомендациями

Немецкого общества клинической химии

РЕАГЕНТ 1: 2 x 50 мл - REAGENT 2: 1 x 20 мл

 

РЕАГЕНТ 1: 6 x 90 мл - REAGENT 2: 6 x 20 мл

REF

17019H

 

17606

 

REF

 

IVD    : для диагностики in vitro               

СТАНДАРТ / КАЛИБРАТОР: термин относится к стандарту/калибратору

РЕАГЕНТ: термин относится к отдельному реагенту

КОНТРОЛЬ: термин относится к контролю

 

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ

• В дополнение к возможным рискам  в отношении реактивных компонентов реактивы могут  содержать нереактивные компоненты, такие как консерванты (то есть азид натрия или другой) и детергенты. Общая концентрация этих компонентов ниже предельной нормы, предусмотренной директивами 67/548/EEC и 88/379/EC и изменения и поправки относительно классификации, маркировки и упаковки опасных препаратов (реагенты) были внесены соответственно. Однако рекомендуется осторожное обращение с реактивами, необходимо избегать попадания в организм, глаза, на кожу и слизистые и использовать лабораторные реактивы согласно надлежащей лабораторной практике.

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

 Существует две разновидности холинэстеразы, которые различаются по типу субстрата, локализации в органах и тканях и биологической роли в организме. Холинэстераза (АХЭ) или ацетилхолин ацетилгидролаза (ЕС 3.1.1.7) содержится в эритроцитах, легких, селезенке и сером веществе мозга. Псевдохолинэстераза (ХЭ) полное название - ацилхолин ацилгидролаза (ЕС 3.1.1.8) содержится в сыворотке, печени, поджелудочной железе, сердце и белом веществе мозга. Определение сывороточной холинэстеразы (ХЭ) используется при диагностике заболеваний печени (гепатитов, циррозов, метастазов опухолей и др.). Во всех указанных случаях активность холинэстеразы снижается.

ПРИНЦИП

В качестве специфического субстрата для холинэстеразы в данном методе используется бутирилтиохолин. Холинэстераза катализирует гидролиз бутирилтиохолина с образованием бутирата и тиохолина. Тиохолин восстанавливает железо (III) в гексацианоферрате до (II).Снижение оптической плотности раствора прямо пропорционально активности холинэстеразы в пробе.

РЕАГЕНТЫ

Реагенты при хранении  в нераспечатанных флаконах при 2-8 °C стабильны до истечения срока годности, который указан на упаковке.

Реагенты должны быть прозрачными; не использовать в случае помутнения.

Содержимое набора и начальные концентрации реагентов:

-   РЕАГЕНТ 1

Пирофосфатный буфер 92 ммоль/л, pH 7.6, гексацианоферрат (lll) 2.5 ммоль/л

-   РЕАГЕНТ 2

Бутирилтиохолин 91 ммоль/л

Штрих-код и кодовый номер флакона, указанный на этикетках реагентов, относятся к использованию продукта на анализаторах Hitachi 911/912.

Пожалуйста, смотрите инструкцию, и подробная информация предоставляется по запросу.

ПОДГОТОВКА РАСТВОРОВ

РЕАГЕНТ 1 и РЕАГЕНТ 2: готовы к использованию. Реагенты в нераспечатанных флаконах стабильны до истечения срока действия, указанного на упаковке. После вскрытия сохраняют стабильность в течение 90 дней при 2-8 °C, если избегать загрязнения и повторно запечатать флакон немедленно после использования.

КАЛИБРОВКА

Для калибровки рекомендуется использовать следующие материалы:

Clin Chem Cal    REF    16550                        4x3 мл

    Лиофилизированная контрольная сыворотка. При использовании следовать инструкции.

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Рекомендуется использовать следующие контрольные материалы на разных уровнях исследуемого образца для подтверждения точности анализа:

Clin Chem Control 1                                REF     

Лиофилизированная контрольная сыворотка. При использовании следовать инструкции.

REF

16150

6x5 мл

Clin Chem Control 2

REF

16250

6x5 мл

Лиофилизированная контрольная сыворотка. При использовании следовать инструкции.

 

 

 


ОБРАЗЕЦ

Свежесобранная сыворотка, плазма (гепарин, ЭДТА) без гемолиза и быстро отделенная от эритроцитов. Не использовать фторид натрия в качестве антикоагулянта, поскольку он блокирует активность холинэстеразы. Собирают образцы в соответствии с процедурой Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам, указанной в библиографии (1). Стабильность образца: 15 дней при 2-8 °C.

Приборы и материалы необходимые, но не предоставленные

  • Стандартное лабораторное оборудование
  • Фильтровый фотометр или спектрофотометр

АНАЛИТИЧЕСКАЯ ПРОЦЕДУРА

Длина волны:                                            405 нм

Оптический путь:                                     1 см

Температура:                                            37 °C Образец/РЕАГЕНТ 1/РЕАГЕНТ 2:                                                1/50/10

Измерение:                                                кинетическая (уменьшение ОП)

Перед проведением анализа довести реагенты до комнатной температуры.

Пропорциональное изменение объемов реакционной смеси, указанных в аналитической процедуре, не влияют на результат.

17019H с. 1/2

Добавить в кюветуХолостая пробаОбразец

Distilled water

20 мкл

-

Sample

-

20 мкл

REAGENT 1

1.0 мкл

1.0  мкл


Осторожно смешать и инкубировать в течение 5 минут. Добавить:

РЕАГЕНТ 2    0.2  мл           0.2 мл


Осторожно смешать. Измерить оптическую плотность холостой пробы и образца через 90 секунд и повторить измерения точно через 30, 60 и 90 секунд. 

Вычислить среднее значение ΔA /30”.

ВЫЧИСЛЕНИЕ

Вычесть среднее значение ΔA/30” холостой пробы из ΔA/30” образца и умножить полученное ΔA/30” на коэффициент F , действительный для условий упомянутого теста (длина волны, объем образца, объем реакционной смеси и оптический путь).

Активность холинэстеразы (ед/л) = (ΔA/30” среднее образца - ΔA/30” среднее холостой пробы) x F*

F* = 131.6 x 103 при 405 нм

РЕФЕРЕНТНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ

Взрослые (37 °C)

Мужчины

5100 - 11700 ед/л

 

Женщины

4000 - 12600 ед/л

У детей до 6 месяцев активность холинэстеразы может быть на 40-50% выше, чем у взрослых. Активность холинэстеразы у молодых женщин составляет 64-75% от активности взрослых мужчин. Во время беременности активность холинэстеразы снижается.

   Рекомендуется, чтобы каждая лаборатория устанавливала свой ожидаемый предел.

ХАРАКТЕРИСТИКИ

Интерференция: Количество указанных веществ оказывает физиологическое влияние на активность холинэстеразы в сыворотке. Менее 5% интерференции наблюдается при наличии  гемоглобина, билирубина и триглицеридов до 500 мг/дл, 20 мг/дл и 1000 мг/дл соответственно.

Диапазон измерений: 160 - 25000 ед/л. ЕслиA/30” меньше 0.190 (активность холинэстеразы выше 25000 ед/л), разведите образец в соотношении 1:10 физиологическим раствором и результат умножьте на 10.

Внутрианалитическая точность: определялась на анализаторе Hitachi 717 в 20 повторностях каждого контроля  (3 уровня тестируемой холинэстеразы - L1/L2/L3). Результаты: L1: среднее значение 3850 ед/л, SD 57.04, CV% 1.48 / L2: среднее значение 6735 ед/л, SD 155.22, CV% 2.30 / L3: среднее значение 13749 ед/л, SD 166.17, CV% 1.21.

Точность между анализами: определялась согласно протоколу EP5-P Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам (3 разных уровня - L1/L2/L3). Результаты:

Среднее

 

Внутри серии

 

Между сериями

Всего

Всего

ед/л

SD

CV%

SD

CV%

SD

CV%

L1

3850

42.07

1.09

46.70

1.21

62.86

1.63

L2

6744

103.79

1.54

92.66

1.37

139.14

2.06

L3

13758

129.55

0.94

126.87

0.92

181.32

1.32


Чувствительность: 160 ед/л. Чувствительность вычислялась в 10 повторностях физиологического раствора и зарегистрирована   
   как "среднее нулевое значение + 3 SD".

Точность: данный тест (y) сравнили с коммерчески  доступным методом, используя упомянутый субстрат (x). Результаты:

N = 89 r = 0.99412, y = 0.86390 x + 204.2644

УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ

Реагенты утилизируются в соответствии с местными нормативными актами.

БИБЛИОГРАФИЯ

1)   NCCLS Document: “Procedures for the Collection of Arterial Blood Specimens; Approved Standard - Third Edition (1999)”.

2)   Kaplan, L.A., Pesce, A.J.: “Clinical Chemistry”, Mosby Ed. (1996).

3)   EU-Dir 1999/11 Commission Directive of 8 March 1999 adapting to technical progress the principles of Good Laboratory Practice as specified in Council Directive 87/18/EEC.

4)   Jakobs, D.S., Kasten, Jr., B.L., Demmott, W.R., Wolfson, W.L.: “Laboratory Test Handbook”, Lexi-Comp and Williams & Wilkins Ed. (2nd Edition - 1990).

5)   Deutsche Gesellschaft fur  Klinische Chemie.   Proposal of  Standard Methods for  the determination of  enzyme catalytic concentrations in serum and plasma at 37°C. Il Cholinesterase (acylcholine acylhydrolase, EC 3.1.1.8). Eur.J.Clin.Chem.Clin. Biochem 30,163 (1992).

Заявка на покупку

Хотите получить больше информации?Обращайтесь к нам:+7 (495) 933-21-46
Экспресс тесты на COVID-19 —
у нас в наличии!
Презентация
S/11050D Гаптоглобин
2х50 + 2х4 мл
В наличии, 65 Евро
Микролитровая центрифуга
MIKRO 185