Анализ антигенных структур методом проточной цитометрии

Реагенты для проточной цитометрии представляет собой серию многоцветных моноклональных антител, конъюгированных с флюорохромами, предназначенных для анализа экспрессии антигенных структур на лимфоидных клетках периферической крови человека. Позволяет оценивать относительное содержание клеток, определяющих основные параметры клеточного иммунитета человека:

  • зрелые Т-клетки;
  • Т-хелперы;
  • Т-супрессоры/цитотоксические;
  • В-клетки;
  • NK-клетки.

В совокупности результатами других лабораторных подходов полученные показатели используют для оценки состояния иммунной системы человека. 

Метод оценки основан на специфическом взаимодействии антиген- антитело,  с последующей идентификацией данной реакции на проточном цитометре посредством детекции молекул флюорохромов, конъюгированных с антителами.

При проведении окрашивания в образцы цельной крови человека вносят антитела, меченые флуорохромами, которые специфически связываются с поверхностными антигенами лимфоцитов. В процессе анализа образцов на проточном цитофлюориметре, поток обтекающей жидкости с клетками  пересекает лазерный луч, что вызывает его рассеивание, а флюорохромы, связавшиеся с клетками, флюреисцеируют. Флуоресцентные сигналы и сигналы рассеяния детектируются и регистрируются прибором, что позволяет получить информацию о размере клетки, ее внутренней структурированности и интенсивности флуоресценции.

Виды антител, используемых в данном методе:

1. Антитела к CD3 связываются с CD3 антигеном, который экспрессируется на человеческих Т-лимфоцитах. Молекулярные массы:  20, 25, 28 kDa. Эти антитела реагируют с 85-90% Т-лимфоцитов периферической крови человека. Не взаимодействует с В-клетками и моноцитами, гранулоцитами и тромбоцитами. Используют для мониторинга относительного содержания Т-клеток в периферической крови человека.

2. Антитела к CD4 связываются с CD4 антигеном, который экспрессирован на человеческих Т-лимфоцитах, имеющих хелперные/ индукторные функции. Молекулярная масса: 54 kDa. Данные антитела реагируют с 50-60% Т-лимфоцитов периферической крови человека. Не взаимодействуют с В-клетками, гранулоцитами и тромбоцитами. Используют для мониторинга относительного содержания Т-хелперов  в периферической крови человека.

3. Антитела к CD8 применяется для идентификации цитотоксических/ супрессорных Т-клеток и субпопуляции NK-клеток. Молекулярная масса антигена: 30 kDa. Антитела реагируют с 20-30% Т-клеток периферической крови человека. Не взаимодействуют с В-клетками, моноцитами, гранулоцитами и тромбоцитами. Применяют для мониторинга субпопуляции цитотоксических/ супрессорных Т-клеток в периферической крови человека.

4. Антитела к CD19 антигену, экспрессированому на человеческих В-клетках и их предшественниках. Не взаимодействует с другими гемопоэтическими клетками. Молекулярная масса 95 kDa. Используют для определения доли В-клеток в периферической крови человека.

5. Антитела к CD16 взаимодействуют с Fc гамма рецептором III антигена CD16, который экспрессирован на нейтрофилах, на моноцитах (слабо), макрофагах (слабо) и NK-клетках. Молекулярная масса: 45-72 kDa. Используют для оценки NK-клеток в периферической крови человека.

6. Антитела к CD 56, в совокупности с антителами к CD16 применяются для оценки NK- клеток в периферической крови человека. CD56 -  трансмембранный гликопротеин, также известный как NCAM. Изоформа молекулы 140 kD  определяется на NK- клетках и NK-T - клетках.  

7. Антитела к CD14 связываются с CD14 антигеном, экспрессированным  на моноцитарных клетках человека, макрофагах и гранулоцитах.  Молекулярная масса: 45 kDa. В комбинации с CD45 применяют для подтверждения лимфоцитарного гейта при исследовании основных параметров клеточного иммунитета.

8. Антитела к CD45  распознают Общий Лейкоцитарный антиген человека с молекулярной массой 200 kDa. Позволяет идентифицировать лейкоциты. В комбинации с CD14 применяют для подтверждения лимфоцитарного гейта при исследовании основных параметров клеточного иммунитета. Взаимодействуют только с гемопоэтическими клетками.

Данная реакция предназначена для исследований в области аллергологии и иммунологии для in vitro диагностики методом проточной цитометрии на приборах различных производителей.