Альфа 2-макроглобулин

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ

Помимо возможных рисков, связанных с активными компонентами реактивы могут содержать дополнительные неактивные компоненты, такие как консерванты (например, азид натрия или другие), а также детергенты. Общая концентрация этих компонентов ниже предельно допустимой нормы, предусмотренной директивами 67/548/EEC и 1999/45/EC. Были соблюдены все требования по классификации, маркировке и упаковки реактивов (опасных препаратов). Однако рекомендуется с реактивами работать осторожно, необходимо избегать попадания их в организм, в глаза, на кожу и слизистые оболочки. С реактивами необходимо работать с соблюдением правил надлежащей лабораторной практики.

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

Альфа 2-макроглобулин является гликопротеином, который используется в качестве маркера мембранной проницаемости и является ингибитором протеиназы плазмы. Возрастание уровня альфа 2-макроглобулина может отмечаться при различных патологических состояниях, таких, как нефротический синдром, нарушение гормональной функции, или нарушения развития в детском возрасте. Сниженные уровни альфа 2-макроглобулина в сыворотке крови может отмечаться при воспалительных процессах, панкреатите и при карциноме простаты.

ПРИНЦИП

Определение альфа 2-макроглобулина основывается на иммунотурбидиметрической специфической реакции при взаимодействии поликлональных антител к альфа 2-макроглобулина с соответствующим антигеном при оптимальном рН в присутствии полиэтиленгликоля (ПЭГ). Мутность иммунного комплекса прямо пропорциональна концентрации исследуемого вещества в образце.

РЕАГЕНТЫ

Реагенты при хранении в нераспечатанных флаконах при 2-8 °C стабильны до истечения срока годности, указанного на упаковке.

Содержимое набора и начальные концентрации реагентов:

- РЕАГЕНТ 1

фосфатный буфер 20 ммоль/л pH 7.5, ПЭГ ≥ 5%, хлорид натрия 150 ммоль/л, азид натрия< 0.1%

- РЕАГЕНТ 2

поликлональные антитела к альфа 2-макроглобулину, азид натрия < 0.1%

- РЕАГЕНТ 3

Goods буфер 50 ммоль/л pH 7.5, хлорид натрия 150 ммоль/л, азид натрия < 0.1%

- Запасной флакон

Пустой флакон вместимостью 20 мл, который можно использовать для приготовления Раствора BC, и загрузки в ряд автоматических биохимических анализаторов. Указания по адаптации на наиболее часто встречающихся приборах предоставляются по запросу.

Штрих-код и кодовый номер флакона, указанный на этикетках реагентов, относятся к использованию продукта на анализаторах Hitachi 911/912. Пожалуйста, смотрите протокол по адаптации, вся дополнительная информация предоставляется по запросу.

Жидкая контрольная сыворотка, два уровня. Для использования следуйте инструкции в наборе.

СТАНДАРТИЗАЦИЯ

CRM 470 (сертифицированный референтный материал) из Бюро Сообщества по референтным материалам (BCR), соответствует RPPHS (референтный препарат по белкам сыворотки крови человека).

ОБРАЗЦЫ

Сыворотка или плазма (гепарин, ЭДТА). Собирают образцы в соответствии с процедурой Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам, указанной в библиографии (1). Стабильность образцов: 5 дней при 2-8°С.

Подготовка образцов/контролей

Перед проведением анализа следует развести образцы и контроли 1:21 (1 объем + 20 объемов) физиологическим раствором.

Приборы и материалы, необходимые, но не поставляемые

• Стандартное лабораторное оборудование.
•  Дистиллированная вода.
• Фотометр со светофильтрами или спектрофотометр.
•  Физиологический раствор (хлорид натрия 9 г/л).

ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА

Длина волны:                     340 (334-365) нм

Оптический путь:              1 см

Температура:                     37 °C

Разбавленный образец/РЕАКТИВ A/Раствор BC: 1/9/1

Реакция:                              конечная точка (увеличение)

Перед проведением анализа нагрейте реагенты до рабочей температуры.

Пропорциональное изменение объемов реакционной смеси, указанных в аналитической процедуре не влияет на результат.

ВЫЧИСЛЕНИЕ

1. Постройте на миллиметровой бумаге калибровочную кривую, отмечая на оси Y значения оптической плотности соответствующего разведения, а по оси Х значения концентрация для каждого калибратора.
2. Обозначьте значение оптической плотности образцов и контролей на калибровочной кривой.
3. . Определите значение концентрации аналита в образцах и контролях по калибровочной кривой.

Коэффициент перевода:

Альфа-2-макроглобулин: [мг/дл] x 0.01 = Альфа-2-макроглобулин [г/л]

РЕФЕРЕНТНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ:

Мужчины: 150 - 350 мг/дл

Женщины: 175 – 420 мг/дл

Рекомендуется, чтобы в каждой лаборатории были установлены свои собственные референтные значения. В диагностических целях полученные результаты должны оцениваться с учетом истории болезни пациента и других клинических данных.

Подготовка реагентов

РЕАГЕНТ A: готов к применению. Реагент в невскрытых флаконах стабилен до окончания срока годности, указанного на упаковке.

Стабильность: 120 дней при 2-8 °C после вскрытия, если не допускать контаминации и закрывать флаконы немедленно после использования.

РЕАГЕНТ BC: развести 1 объем Реагента B в 3 объемах Реагента C, осторожно перемешать, избегая образования пены. Стабильность: 60 дней при 2-8°C после приготовления, если не допускать контаминации и закрывать флаконы немедленно после использования.

КАЛИБРОВКА

Для калибровки рекомендуется использовать следующие материалы:

Калибратор белки плазмы    REF     11200D          3x1 мл

Жидкая калибровочная сыворотка. Использовать калибратор для построения калибровочной кривой как указано в таблице.

Калибратор, в отличие от образцов и контролей, предварительно разбавлять 1:21 не нужно.

ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОЙ КРИВОЙ

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Рекомендуется использовать следующие контрольные материалы разных уровней для подтверждения точности анализа:

Иммуноконтроль 1           REF     11210       1x5 мл

Иммуноконтроль 2           REF     11212       1x5 мл

Жидкая контрольная сыворотка. Для использования следуйте инструкции в наборе.

Иммуноконтроль (2 уровня)          REF     11211A    2x(2x1) 

ХАРАКТЕРИСТИКИ

Интерференция: на результат теста не влияет присутствие билирубина до 30 мг/дл, гемоглобина до 0.5 г/дл, липемии (триглицериды до 1000 мг/дл) и ревматоидного фактора до 70 МЕ/мл.

Диапазон измерений: 70 - 1500 мг/дл. Если концентрация образца превышает диапазон измерений, разведите его физиологическим раствором и результаты умножьте на коэффициент разведения.

Нижний предел обнаружения: 10 мг/дл. Нижний предел обнаружения представляет собой самую низкую измеряемую концентрацию исследуемого вещества, которую можно отличить от нулевого стандарта.

Эффект прозоны: эффект прозоны не наблюдается вплоть до концентрации 13200 мг/дл.

Следующие результаты оценки воспроизводимость внутри серии и между сериями анализов, а также точности получены с использованием автоматического анализатора, при случайной выборке и автоматическом разведении образцов. Эти данные могут меняться в зависимости от характеристик прибора.

Воспроизводимость внутри серии анализов: определялась в 20 повторностях каждого контроля (2 уровня - L1/L2). Результаты:

L1: среднее значение 98.70 мг/дл, SD 2.03, CV% 2.06

L2: среднее значение 295.45 мг/дл, SD 5.47, CV% 1.85.

Воспроизводимость между сериями анализов: определялась в течение 10 дней в 2 повторностях для каждого контроля (2 уровня - L1/L2). Результаты:

Точность: тест (у) сравнили с коммерчески доступным иммунотурбидиметрическим методом (x). Результаты:

N = 60, r = 0.99675, y = 1.0171 x  -  2.8505.

УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ

Реагенты утилизируются в соответствии с местными нормативными актами.

БИБЛИОГРАФИЯ

1) NCCLS. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture; Approved Standard - Fifth Edition (H3-A5). Wayne, PA: The National Committee for Clinical Laboratory Standards, 2003.

2) Kaplan, L.A., Pesce, A.J.: “Clinical Chemistry”, Mosby Ed. (1996).

3) EU-Dir 1999/11 Commission Directive of 8 March 1999 adapting to technical progress the principles of Good Laboratory  Practice as specified in Council Directive 87/18/EEC.

4) Tietz Textbook of Clinical Chemistry (Edited by Burtis CA and Ashwood ER Eds): Third Edition WB Saunders Company (1999).